在使用HPLC进行分析方法开发的时候，影响分离选择性以及色谱峰对称性的因素有很多，即包括仪器硬件方面的因素，如色谱柱的选择，流动相的种类、添加剂的种类以及浓度、流动相pH的控制、色谱柱温度的控制等等，也包括仪器控制的软件部分，如检测器带宽的选择、采样频率的选择等等。

在HPLC方法开发的过程中，色谱柱以及流动相的选择起决定性作用，而对于流动相的pH的控制，不仅会对色谱柱的稳定性产生影响而且对于分离的选择性以及色谱峰的对称性也起到至关重要的作用(特别是对于可离子化的极性酸碱化合物来说)。

相关详情见链接pH对分离选择性以及峰形对称性的影响。